本发明涉及一种用于含伯胺或仲胺的手性化合物检测的柱前衍生试剂及其合成方法，该衍生试剂I化学名为(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺，本方法合成出的衍生试剂稳定，可用于检测无紫外吸收的手性胺化合物或代替手性柱检测一些有紫外吸收的手性化合物。
1.一种如结构式I所述的化合物的制备方法：ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="192"/>xa0xa0xa0xa0xa0xa0xa0xa0xa0xa0xa0结构式I；该化合物的合成方法包括如下步骤：a)xa0以2-氯-3,5-二硝基苯甲酸与氯化亚砜进行酰氯化反应得到2-氯-3,5-二硝基苯甲酰氯；将2-氯-3,5-二硝基苯甲酸,氯化亚砜混合，滴入DMF二甲基甲酰胺，磁力搅拌，升温，反应，减压浓缩蒸出氯化亚砜，冷却至室温，得淡黄色固体即为2-氯-3,5-二硝基苯甲酰氯；b)xa0以2-氯-3,5-二硝基苯甲酰氯与S(-)-α-甲基苄胺进行胺化反应得到（S）-2-氯-3,5-二硝基-N-（1-苯乙基）苯甲酰胺；取2-氯-3,5-二硝基苯甲酰氯，溶于四氢呋喃中，冰浴搅拌下滴加xa0Sxa0(-)-α-甲基苄胺的四氢呋喃溶液，滴加完成后，缓慢升至室温反应2小时，检测反应完成后，停反应；减压旋蒸浓缩除去四氢呋喃，加入水和乙酸乙酯萃取，有机相分别用10%稀盐酸、饱和碳酸钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋去大部分乙酸乙酯加入甲基叔丁基醚即得到淡黄色结晶状固体（S）-2-氯-3,5-二硝基-N-（1-苯乙基）苯甲酰胺。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：酰氯化反应温度40～80℃。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：胺化反应于-10～30℃进行。技术领域
本发明属医药领域，涉及一种用于含伯胺或仲胺的手性化合物柱前衍生试剂的合成方法及应用，具体涉及一种手性胺柱前衍生试剂(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺的合成方法及应用。
背景技术
随着药物化学的日益发展，含伯胺或仲胺的手性化合物作为药物中间体及成品原料药的种类也越来越多，很多这些含伯胺或仲胺的手性中间体及成品原料药存在紫外吸收很弱或普通C18柱难以分离的情况。如何能有效的控制这些含伯胺或仲胺的手性化合物的质量，找到一种灵敏、高效应用范围广泛的衍生试剂显得极为重要。目前在手性伯胺或仲胺药物质量控制中，含量检测方面用得较多的还是非水滴定法，异构体检测方面用得较多的还是比旋度测定法，但这些检测方法的灵敏度和精确度与操作的条件和环境有很大的关联。近年来ICH(人用药品注册技术要求国际协调会)对手性药物的异构体控制的要求更加严格，单用比旋度来控制手性药物的手性异构体显得不够严谨。为了精确对无紫外吸收的伯胺或仲胺药物有关物质及手性伯胺或仲胺药物中的异构体进行有效控制，我们有必要研究和发明一种更为科学有效、精密度高、重现性好的控制异构体的方法。
发明内容
本发明的目的就是为手性胺的检测提供一种灵敏度高的衍生试剂(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺的合成方法。本方法合成出一种稳定的衍生试剂(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺，并用其对手性胺进行柱前衍生化后再用HPLC进行定量检测，该法衍生过程耗时少，操作简单，精密度好，灵敏度高，可用于检测无紫外吸收的手性胺化合物或代替手性柱检测一些有紫外吸收的手性化合物。化合物(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺的结构式如下：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="590"/>上述化合物的合成方法包括如下步骤：(1)以2-氯-3，5-二硝基苯甲酸与氯化亚砜进行酰氯化反应得到2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯；(2)以2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯与S(-)-α-甲基苄胺进行胺化反应得到(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺。上述合成方法中酰氯化反应温度40～80℃。上述合成方法中胺化反应于-10～30℃进行。其中，2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯的制备：将2-氯-3，5-二硝基苯甲酸，氯化亚砜混合，滴入DMF(二甲基甲酰胺)，磁力搅拌，升温，反应，减压浓缩蒸出氯化亚砜，冷却至室温，得淡黄色固体即为2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯。(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺的制备：取2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯，溶于四氢呋喃中，冰浴搅拌下滴加S(-)-α-甲基苄胺的四氢呋喃溶液，滴加完成后，缓慢升至室温反应2小时，检测反应完成后，停反应。减压旋蒸浓缩除去四氢呋喃，加入水和乙酸乙酯萃取，有机相分别用稀盐酸、饱和碳酸钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋去大部分乙酸乙酯加入甲基叔丁基醚即得到淡黄色结晶状固体(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺。本发明合成方法有2个创新点：(1)革除了缚酸剂：大多数情况下酰氯和胺的反应时需要加入与酰氯等当量的三乙胺、吡啶或碳酸氢钠作为“缚酸剂”，经工艺筛选，革除了缚酸剂，并提高了收率，成品含量增加，其有益效果见实施例3。(2)更换加料顺序，提高了收率，成品含量增加，取得了意想不到的效果，见实施例4。工艺路线如下：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>根据本发明所制得(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺和(R)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺纯度大于98.0％，总收率75％以上。本发明所述的方法收率高，产品纯度符合含伯胺或仲胺的手性化合物的柱前衍生要求，且该方法为容易实现放大生产的制备方法。该制备工艺其具体体现在：原料价廉易得，反应步骤短，操作简单，总收率较高，产物纯度高。本发明发现和制备的(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺性质稳定，与伯胺或仲胺化合物反应速度快，可广泛伯胺或仲胺化合物，特别是手性伯胺或仲胺的检测用的高灵敏的液相色谱衍生试剂。
具体实施方式
下列实施例用于进一步叙述本发明，但它并不是对本发明的范围的任何限制。实施例1xa0xa02-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯的制备将24.6克2-氯-3，5-二硝基苯甲酸(100mmol)，150ml氯化亚砜(2.0mol)加入500毫升单口烧瓶中，滴入0.5mlDMF，磁力搅拌，升温至60～70℃，反应5～6小时，减压浓缩蒸出氯化亚砜，冷却至室温，得25.8克淡黄色固体即为2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯，收率97.4％。实施例2(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺的合成方法一取0.48g(4mmol)S(-)-α-甲基苄胺，0.4g(4mmol)三乙胺溶于5ml四氢呋喃的溶液，冰浴5～10℃，搅拌下滴加1.06g(4mmol)2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯，溶于1ml四氢呋喃中下滴加，滴加完成后，缓慢升至室温反应2小时，TLC检测反应完成后，停反应。减压旋蒸除去四氢呋喃，加入10ml水和10ml乙酸乙酯萃取，水层再用10ml乙酸乙酯萃取一次，合并有机相。有机相分别用10％稀盐酸水溶液、饱和碳酸钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗三次，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋去乙酸乙酯即得到黄色油状物，加入6ml甲基叔丁基醚搅拌，析出淡黄色结晶，抽滤，干燥得0.52克淡黄色结晶固体即为(R)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺，收率：37.3％，HPLC纯度为：93.7％。实施例3加入三乙胺不同的量对(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺的制备收率，质量的影响：按照制备方法一，选用2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯与三乙胺的配比分别为1∶0.9、1∶0.7、1∶0.5、1∶0.3、1∶0.1，完成5个实验，得到5个样品，其收率，质量数据见下表：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>结论：大多数情况下酰氯和胺的反应时需要加入与酰氯等当量的三乙胺、吡啶或碳酸氢钠作为“缚酸剂”，而从以上试验中看出2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯与S(-)-α-甲基苄胺的反应试验中看出三乙胺的比例越低，收率较好、质量较好，于是我们设计了实施例4，不加三乙胺，且更换加料顺序，取得了意想不到的效果。实施例4(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺的合成方法二取10.6g(40mmol)2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯，溶于53ml四氢呋喃中，冰浴5～10℃搅拌下滴加4.8g(40mmol)S(-)-α-甲基苄胺溶于9.6ml四氢呋喃的溶液，滴加完成后，缓慢升至室温反应2小时，检测反应完成后，停反应。减压旋蒸除去四氢呋喃，加入30ml水和30ml乙酸乙酯萃取，水层再用30ml乙酸乙酯萃取一次，合并有机相。有机相分别用10％稀盐酸水溶液、饱和碳酸钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗三次，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋去乙酸乙酯即得到黄色油状物，加入60ml甲基叔丁基醚搅拌，析出淡黄色结晶，抽滤，干燥得11.2克淡黄色结晶固体即为(S)-2-氯-3，5-二硝基-N-(1-苯乙基)苯甲酰胺，收率：80.3％。纯度：98.8％¹Hxa0NMR(CHCl₃)：δ8.66(d，1H)，8.56(d，1H)，7.31～7.42(m，5H)，6.25(d，1H)，5.35(m，1H)，1.67(d，3H)。